Western 及 IP 裂解液的實際應(yīng)用案例
更新時間：2025-08-14 點擊次數(shù)：135
癌癥研究中的蛋白表達分析
在探究乳腺癌細胞中特定致癌基因的表達調(diào)控機制時，研究人員運用 Western 及 IP 裂解液對乳腺癌細胞系進行處理。通過使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解液，在低溫環(huán)境下裂解細胞，有效防止了蛋白質(zhì)的降解和修飾，確保所提取蛋白質(zhì)的完整性與活性。經(jīng)裂解、離心獲取細胞總蛋白后，利用 Western Blot 技術(shù)分析目標致癌蛋白的表達水平。實驗結(jié)果顯示，相較于正常乳腺細胞，乳腺癌細胞中該致癌蛋白的表達量顯著上調(diào)，且其磷酸化修飾程度也發(fā)生明顯改變。這一成果為深入理解乳腺癌的發(fā)病機制提供了關(guān)鍵線索，為后續(xù)開發(fā)針對該致癌蛋白的靶向治療藥物奠定了基礎(chǔ)。
神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的蛋白質(zhì)相互作用研究
科研團隊在研究神經(jīng)退行性疾病（如阿爾茨海默病）相關(guān)蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)時，IP 裂解液發(fā)揮了重要作用。以研究 β - 淀粉樣蛋白（Aβ）與 tau 蛋白的相互關(guān)系為例，實驗人員首先使用溫和型 IP 裂解液處理神經(jīng)元細胞或腦組織樣本。這種裂解液能夠在保持蛋白質(zhì)天然構(gòu)象的前提下，破壞細胞結(jié)構(gòu)，釋放細胞內(nèi)蛋白。隨后，利用針對 Aβ 蛋白的特異性抗體進行免疫沉淀實驗，從復(fù)雜的蛋白混合物中富集與 Aβ 相互作用的蛋白質(zhì)，其中就包括 tau 蛋白。通過對免疫沉淀復(fù)合物的進一步分析，發(fā)現(xiàn) Aβ 與 tau 蛋白的異常結(jié)合會導(dǎo)致 tau 蛋白過度磷酸化，進而促進神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成，這一關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)為揭示阿爾茨海默病的病理進程提供了重要依據(jù)，有助于開發(fā)新的治療策略來阻斷這一有害的蛋白相互作用過程。
免疫學(xué)研究中的抗體開發(fā)與鑒定
在開發(fā)針對新型病原體的單克隆抗體過程中，Western 及 IP 裂解液用于篩選和鑒定具有高特異性和親和力的抗體。研究人員將病原體感染細胞或表達病原體相關(guān)抗原的細胞作為研究對象，采用 Western 裂解液裂解細胞，獲得包含病原體抗原的總蛋白提取物。通過 Western Blot 實驗，將不同克隆的單克隆抗體與總蛋白提取物進行反應(yīng)，篩選出能夠特異性識別目標抗原的抗體克隆。同時，利用 IP 裂解液進行免疫沉淀實驗，驗證篩選出的抗體與抗原在細胞內(nèi)環(huán)境中的真實結(jié)合能力，進一步評估抗體的質(zhì)量和有效性。經(jīng)過多輪篩選和鑒定，成功獲得了針對該病原體關(guān)鍵抗原的高效單克隆抗體，為后續(xù)的免疫診斷試劑開發(fā)和疫苗研究提供了有力工具。
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